可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)説明書

可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)

產(chǎn)品簡介：

有機酸存在于多種生命體中，植物組織或果實中有機酸種類和數(shù)量因植物組織或果實種類和品種而異，進而影響果實的口味、酸糖比、耐儲性，植物組織或果實中含有蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等多種有機酸。

雅吉生物可滴定酸(TA)檢測試劑盒(滴定法)又稱有機酸檢測試劑盒，檢測原理是根據(jù)酸堿中和原理進行的，即用已知濃度的*溶液滴定待測樣品,根據(jù)*的消耗量計算待測樣品中可滴定酸的含量，主要用于定量檢測植物組織或果實中可滴定酸(如蘋果酸、檸檬酸、酒石酸、草酸等)的含量，該50T試劑盒可以檢測約47~48次樣本。

該試劑盒僅用于科研領域，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1、實驗材料∶桃子、李子、蘋果、杏等果實或其他植物組織

2、研缽或勻漿器、濾紙或紗布

3、離心管或試管、三角瓶、滴定管、容量瓶

4、水浴鍋、離心機

5、pH計、藍色石蕊試紙

6、滴定分析用蒸餾水(無CO_2，無 NH₃ ) 

操作步驟(僅供參考)：

1、配制TA Lysis Buffer工作液：取適量的TA Lysis Buffer(10×)，

按TA Lysis Buffer(10×)︰蒸餾水=1∶9的比例混合，即為TA Lysis Buffer工作液。

2、準備樣品︰取果實或其他植物組織，洗凈，擦干，稱取剪碎的新鮮樣品5g，置于研缽或勻漿器，加入10ml TA Lysis Buffer 工作液，充分研磨或勻漿后轉(zhuǎn)入三角瓶，用少量TA Lysis Buffer工作液沖洗研缽或勻漿器，一并轉(zhuǎn)入三角瓶，補加TA Lysis Buffer工作液約30ml ,混勻，(置于80℃恒溫水浴鍋)靜置浸提30min，期間攪拌數(shù)次。(冷卻后)用濾紙或紗布過濾(也可4000r/min離心10min),留取濾液(或上清液)轉(zhuǎn)入50ml容量瓶中，用TA Lysis Buffer 工作液沖洗殘渣2~3次，合并濾液并定容至50ml，充分混勻，即為可滴定酸提取液，4℃保存待用。

3、標定TA滴定液：取20ml TA標定液，滴加5OμL酚酞指示劑，用TA滴定液(0.1 mol/L)滴定至溶液呈粉紅色；按如下公式計算TA滴定液準確濃度:

TA滴定液準確濃度(nb ,mol/L)=0.24/(TA滴定液所用毫升數(shù)×0.2042)

4、滴定測定∶取10ml可滴定酸提取液加至三角瓶，滴加50μL酚酞指示劑，用已經(jīng)標定好的TA滴定液進行滴定至溶液初現(xiàn)粉紅色并在0.5min內(nèi)不褪色為終點，記錄TA滴定液的用量；以TA Lysis Buffer工作液代替可滴定酸提取液進行滴定，作為空白對照。

計算︰

根據(jù)TA滴定液消耗量，計算樣品中可滴定酸含量，以百分比表示。

計算公式如下∶

可滴定酸含量(%)={V×nb×f×(V₁-V₀)×100%}/(W×V_S)

100g 樣品鮮重中可滴定酸含量(g/100g)={V×nb×f×(V₁-V₀)×100}/(W×V_S)

式中:

V=樣品提取液的總體積(ml)

nb=標定后的TA滴定液摩爾濃度(mol/L= mmol/mL)

V₁=滴定提取液所用的TA滴定液的體積(ml)

V₀=滴定蒸餾水所用的TA滴定液的體積(ml)

W=樣品鮮重(g)

V_S=滴定時所取濾液(可滴定酸提取液)的體積(ml)，

本實驗中V_S=10ml

f=折算系數(shù)(1mmol TA滴定液換算為有機酸克數(shù)的系數(shù)，g/mmol)

幾種常見有機酸的換算系數(shù)

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發(fā)現(xiàn)有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V₀最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數(shù)帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應采用電位滴定法。 

有效期∶6個月有效，4C保存。 

附錄:

如果提取液顏色影響滴定終點的確定，可在藍色石蕊試紙上加1滴蒸餾水和1滴提取液，當試紙不再變紅時為終點；除此之外還可用pH計測定，以避免提取液顏色對確定終點的影響；其方法如下∶將pH計的電極進入提取液中，邊攪拌邊滴加TA滴定液，記錄pH的變化，以滴加滴定液的體積為橫坐標，pH為縱坐標，制作酸堿滴定曲線，滴定曲線的兩個“滴定拐點"間的中點即為滴定終點。

有些果蔬樣品提取液滴定至近終點時出現(xiàn)黃褐色，這時可加入提取液體積的1~2倍熱水稀釋，加入酚酞指示劑0.5~1ml，再繼續(xù)滴定，使酚酞變色易于觀察。 

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