支原體污染處理技巧

細(xì)胞增殖速度怎么變得這么慢了？細(xì)胞發(fā)生病變，出現(xiàn)細(xì)胞變圓、從培養(yǎng)瓶壁脫落又是什么情況？要瘋了，培養(yǎng)細(xì)胞怎么就這么難呢~實(shí)驗(yàn)過(guò)程中存在的“幽靈"，即使是經(jīng)驗(yàn)豐富的老研究員也不得不面對(duì)，沒(méi)錯(cuò)，它就是支原體感染。

支原體感染的威脅

支原體感染率高達(dá)63%，這也使得在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中“支原體污染"問(wèn)題變成全球性，只要提及支原體污染，研究員往往都會(huì)陷入困惑。

它是一種類(lèi)似細(xì)菌但不具有細(xì)胞壁的原核微生物，直徑在 50-300 nm，可輕松通過(guò)0.22um濾膜混入培養(yǎng)系統(tǒng)中，普通的抗生素（如培養(yǎng)細(xì)胞常用的雙抗）對(duì)它不起作用。

而且細(xì)胞培養(yǎng)物被支原體污染后往往沒(méi)有明顯的跡象，不像細(xì)菌或真菌污染有肉眼可見(jiàn)的變化，甚至細(xì)胞本身仍能在一段時(shí)間內(nèi)繼續(xù)維持正常的形態(tài)和增殖速率。

這些特點(diǎn)給我們判斷和處理支原體污染帶來(lái)了一定的麻煩。

1. 可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，因?yàn)橹гw會(huì)與培養(yǎng)基中的其他成分相互作用，影響其他微生物的生長(zhǎng)，從而干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的收集和分析。

2. 支原體污染可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備和儀器造成損害，尤其是對(duì)實(shí)驗(yàn)室的生物安全柜和其他相關(guān)設(shè)備，因?yàn)橹гw會(huì)在其上生長(zhǎng)并形成菌膜，影響設(shè)備的正常運(yùn)行。如果支原體數(shù)量較少，可能不會(huì)對(duì)測(cè)序結(jié)果產(chǎn)生明顯影響。

3. 如果支原體數(shù)量較多，它們可能會(huì)在測(cè)序過(guò)程中影響樣本的質(zhì)量，從而導(dǎo)致測(cè)序結(jié)果不準(zhǔn)確。此外，支原體污染可能會(huì)導(dǎo)致樣本中的序列 reads 數(shù)量減少，從而影響序列組裝和基因表達(dá)分析等后續(xù)分析結(jié)果。

因此，在進(jìn)行測(cè)序前，應(yīng)該采取適當(dāng)?shù)拇胧﹣?lái)避免和減少支原體污染，如使用無(wú)菌技術(shù)、嚴(yán)格控制實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、使用高質(zhì)量的試劑和儀器等。如果已經(jīng)出現(xiàn)了支原體污染，應(yīng)該及時(shí)檢測(cè)和處理，以減少對(duì)測(cè)序結(jié)果的影響。

支原體檢測(cè)方式

對(duì)此我們并非手足無(wú)措，通過(guò)嚴(yán)密的消毒措施和合理的實(shí)驗(yàn)室管理，我們可以有效預(yù)防支原體感染，保障研究的順利進(jìn)行。有鑒于支原體污染對(duì)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的重要負(fù)面影響，定期檢測(cè)細(xì)胞是否被支原體污染成為了很多實(shí)驗(yàn)室的必然選項(xiàng)。

常見(jiàn)的支原體檢測(cè)技術(shù)包括：分離培養(yǎng)法，DNA熒光染色檢測(cè)法等等，但這里更推薦使用等溫?cái)U(kuò)增法。其中分離培養(yǎng)法和DNA應(yīng)該染色法操作難度較高，而等溫?cái)U(kuò)增法作用濃度低，細(xì)胞毒性小，使用方便，即拆即用，只要添加到支原體污染的培養(yǎng)細(xì)胞中孵化一周即可。