細(xì)胞貼壁不牢？快速修復(fù)培養(yǎng)技巧分享

細(xì)胞貼壁不牢

一 、常見原因分析

消化過度

胰酶作用過久/濃度過高 ：破壞膜表面粘附蛋白 ，導(dǎo)致無法重新附著 。

吹打力度過大 ：機械損傷使胞外基質(zhì)脫落。

環(huán)境因素

pH異常 （如NaHCO?分解致pH過堿） ：影響整合素介導(dǎo)的粘附 。

血清/基質(zhì)不足 ：缺乏纖維連接蛋白 、層粘連蛋白等粘附因子 。

其他問題

支原體污染 ：分泌毒素干擾代謝。

容器材質(zhì)不適 ：玻璃瓶未包被時粘附率低于TC處理塑料瓶 。

二 、快速修復(fù)方案

（一 ）緊急處理步驟

輕柔離心重鋪

-收集懸浮細(xì) ，1000rpm離心5min后 ，用含20%血清的新鮮培養(yǎng)基重懸 ，接種至預(yù)包被的培養(yǎng)器皿中。

短期高血清支持

-換用含15%-20%血清的培養(yǎng)基（24小時后恢復(fù)常規(guī)濃度） ，促進(jìn)粘附蛋白分泌 。

（二 ）長期優(yōu)化措施

問題類型解決方案

消化控制-縮短胰酶作用時間（如293T僅需2分鐘）

改用低濃度胰酶（0.05%-0.25%）

容器包被-多聚賴氨酸（0.1mg/ml包被30分鐘）

明膠/鼠尾膠原預(yù)處理瓶底

環(huán)境調(diào)節(jié)-穩(wěn)定CO?濃度（5%）與溫度（37℃±0.5）

檢測并調(diào)整pH至7.2-7.4

污染排查-支原體檢測（如PCR） ，污染則棄用并消毒

（三 ）特殊案例處理

HEK293/293T等難貼璧細(xì)胞:

采用無鈣鎂PBS漂洗后直接換液 ，減少擾動 。

三 、預(yù)防性建議

傳代時保留部分舊培養(yǎng)基 （含自分泌粘附因子） ，與新培養(yǎng)基混合使用 。

復(fù)蘇后首周使用高血清培養(yǎng)基 （20%） ，幫助恢復(fù) 。

通過上述方法 ，通常24-48小時內(nèi)可顯著改善粘附率 。若仍無效 ，建議更換新批次細(xì)胞株 。

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