ATCC細(xì)胞——鑒別細(xì)胞系純度的方法

鑒別細(xì)胞系純度的方法有多種，涵蓋了細(xì)胞形態(tài)觀察、細(xì)胞生物學(xué)特性檢測、分子生物學(xué)檢測以及微生物污染檢測等方面，以下是具體介紹：

細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

光學(xué)顯微鏡觀察：在普通光學(xué)顯微鏡下，觀察細(xì)胞的形態(tài)、大小、形狀、細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)的比例等特征。每種細(xì)胞系都有其典型的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)，如上皮細(xì)胞呈多邊形或柱狀，成纖維細(xì)胞呈梭形。若細(xì)胞系中存在多種形態(tài)的細(xì)胞，可能提示純度不高。

電子顯微鏡觀察：利用電子顯微鏡可以更清晰地觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞表面的微絨毛、細(xì)胞器的形態(tài)和分布等。通過與該細(xì)胞系已知的超微結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行對比，判斷細(xì)胞的純度，還能發(fā)現(xiàn)一些光學(xué)顯微鏡下難以察覺的細(xì)胞類型或雜質(zhì)。

細(xì)胞生物學(xué)特性檢測

生長特性檢測

生長曲線測定：通過繪制細(xì)胞的生長曲線，觀察細(xì)胞的潛伏期、對數(shù)生長期、平臺期等生長階段的特征。正常的細(xì)胞系在相同培養(yǎng)條件下，生長曲線具有一定的穩(wěn)定性和特征性。若細(xì)胞系純度高，生長曲線應(yīng)符合該細(xì)胞系的典型規(guī)律；若生長曲線異常，可能存在其他細(xì)胞的干擾。

細(xì)胞周期分析：采用流式細(xì)胞術(shù)等方法分析細(xì)胞周期，了解細(xì)胞在 G0/G1 期、S 期、G2/M 期的分布比例。不同細(xì)胞系的細(xì)胞周期分布有其特點(diǎn)，若細(xì)胞系中混入其他細(xì)胞，可能導(dǎo)致細(xì)胞周期分布發(fā)生改變。

細(xì)胞表面標(biāo)志物檢測：利用免疫熒光染色、流式細(xì)胞術(shù)等技術(shù)，檢測細(xì)胞表面特定的標(biāo)志物。每種細(xì)胞系都有其dute的表面標(biāo)志物組合，通過檢測這些標(biāo)志物的表達(dá)情況，可以判斷細(xì)胞的純度。若細(xì)胞系中存在不表達(dá)該標(biāo)志物或表達(dá)其他異常標(biāo)志物的細(xì)胞，說明細(xì)胞系可能不純。

分子生物學(xué)檢測

染色體分析：通過染色體核型分析技術(shù)，觀察細(xì)胞的染色體數(shù)目、形態(tài)、結(jié)構(gòu)等特征。每種細(xì)胞系都有其特定的染色體核型，若細(xì)胞系中存在染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常的細(xì)胞，或者出現(xiàn)與該細(xì)胞系不同的染色體核型，可能提示細(xì)胞系不純。

基因表達(dá)分析

RT-PCR 檢測：通過反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)，檢測細(xì)胞系中特定基因的表達(dá)情況。選擇細(xì)胞系特異性表達(dá)的基因作為檢測指標(biāo)，若檢測到其他不應(yīng)該表達(dá)的基因，可能存在其他細(xì)胞的污染。

基因芯片技術(shù)：利用基因芯片可以同時檢測大量基因的表達(dá)水平，通過與已知的該細(xì)胞系基因表達(dá)譜進(jìn)行對比，分析細(xì)胞系的純度。若基因表達(dá)譜與標(biāo)準(zhǔn)譜存在較大差異，可能細(xì)胞系中混入了其他細(xì)胞。

微生物污染檢測

細(xì)菌和真菌檢測：采用細(xì)菌和真菌培養(yǎng)的方法，將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到相應(yīng)的培養(yǎng)基上，在適宜的溫度下培養(yǎng)一段時間，觀察是否有細(xì)菌或真菌生長。也可使用革蘭氏染色等方法，在顯微鏡下直接觀察細(xì)胞培養(yǎng)物中是否存在細(xì)菌或真菌。

支原體檢測：支原體是細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染微生物，可采用支原體檢測試劑盒，如熒光定量 PCR 法、酶聯(lián)免疫吸附法等，檢測細(xì)胞培養(yǎng)物中是否存在支原體污染。若細(xì)胞系被支原體污染，會影響細(xì)胞的生長和代謝，導(dǎo)致細(xì)胞系不純。