甘油三酯(TG)檢測(GPO-PAP雙試劑微板法)

甘油三酯(Triglyceride，TG)又稱三酰甘油或三油酸甘油酯，是三分子長鏈脂肪酸和一分子甘油形成的脂肪分子，是人體內含量

最多的脂類，大部分組織均可以利用甘油三酯分解產物供給能量，同時肝臟、脂肪等組織還可以進行甘油三酯的合成。目前，

檢測甘油三脂的常用方法有酶法和化學法。酶法測定具有簡便、快捷、微量且試劑穩定等優點，適用于手工和自動化測定。

化學法是使用異丙醇等不同的有機溶劑從血清中抽提出甘油三酯， 分層或者吸附去除磷脂等影響因素，再經皂化、氧化，

由顯色反應進行測定。目前的化學法是乙酰丙酮比色法，其中包括吸附抽提法和分溶抽提法。

甘油三酯(TG)檢測(GPO-PAP雙試劑微板法)其檢測原理是組織勻漿液或血清中的甘油三脂經TG抽提液處理后，

甘油三脂被保留在上層，再經皂化生成甘油，后被氧化劑氧化成甲醛，甲醛與乙酰丙酮在銨根離子存在時，

發生縮合反應(Hantgsch反應)，生成帶熒光的黃色物質即3,5-二乙酰-1,4-雙氫二甲基吡啶，用分光光度計在420nm處進行比色

測定，與相同處理的標準管對比計算其含量。本試劑盒可用于人或動物的血清、血漿、腦脊液等樣本中的甘油三脂含量的測定。

本方法所用試劑室溫下可保存半年以上，比較穩定，在0.25~11.44mg/ml（0.28~12.93mmol/L）之間有良好的線性關系，

檢測范圍較寬。本產品僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、取內徑為8mm的玻璃試管2支，分別加入白陶土-腦磷脂混懸液0.2ml。

2、靜脈采血1ml，立即取下針頭，沿管壁向各試管注入血液0.5ml，立即混勻并啟動秒表計時，并置于37℃水浴中。

3、每隔10s輕搖試管一次，觀察管內血液流動情況，直至血液凝固。記錄血液凝固所需時間，即為ACT。

4、取2支試管血液凝固時間的平均值作為ACT 值。

計算：參考區間： (1.77±0.76)min

4、配制標準品工作液︰如果檢測血清、尿液等樣品，按取丙酮酸標準(6mg/ml):蒸餾水=1：99的比例配制，使濃度達到60μg/ml，如果檢測組織樣品按丙酮酸標準(6mg/ml) :組織勻漿液(1×)=1:99的比例配制，使濃度達到60μg/ml。

注意事項:

1、實驗材料應盡量新鮮，如取材后不立即使用，應存于-20°C.

2、實驗用蒸餾水不能含有二氧化碳，可用新煮沸且冷卻后的蒸餾水，并蓋緊口。

3、TA滴定液為堿性溶液，有腐蝕性，請小心操作。

4、TA標定液容易長菌，宜4℃保存，一旦發現有絮狀物請棄用。

5、果實中含酸量較少時可將TA滴定液適當稀釋后使用，可考慮用0.01~0.05M  TA滴定液進行滴定。

6、TA滴定液含量計算公式中，V0最好為3次空白測定的平均值。

7、如果所測樣品的濃度過高，應用TA Lysis Buffer工作液稀釋樣品后重新測定，并將稀釋倍數帶入公式。

8、如果樣品顏色較深，滴定終點不易觀察，應采用電位滴定法。

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