G5U Plus HiFi DNA Polymerase試劑

G5U Plus HiFi DNA Polymerase試劑G5U Plus High-Fidelity DNA Polymerase， 由分子酶進(jìn)化平臺（in silico Design & invitro Evolution Workflow

篩選獲得，其融合Q5和Q5U DNA聚合酶的性能于一體，使其成為一酶多用的全能選手。G5U Plus DNA聚合酶來源于高保真

DNA聚合酶，并加入了增強(qiáng)的延伸結(jié)構(gòu)，使其具有長片段擴(kuò)增、高產(chǎn)、快速擴(kuò)增能力。強(qiáng)壓力篩選的外切活性區(qū)域，

使其具有超保真性能（與Q5同水平），底物活性中心的改造，使其具有dUTP滲入的能力和擴(kuò)增含尿嘧模板的能力。

G5U Plus DNA聚合酶具有4kb/min以上的延伸速度，可輕松擴(kuò)增8kb的基因組DNA、20kb的λDNA。

該酶具有5’-3’的聚合酶活性、強(qiáng)3’-5’的外切酶活性，產(chǎn)物為平末端。

許多具有高保真擴(kuò)增性能的聚合酶來為 B型 DNA 聚合酶，在遇到 DNA 模板中的尿嘧基時(shí)停止復(fù)制。

G5U Plus刪除了尿嘧結(jié)合域，使其能夠讀取和擴(kuò)增含有尿嘧的模板，該性能賦予其的“U" 特征。

該特征有兩個(gè)重要的應(yīng)用方向：（1）用于超保真擴(kuò)增重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化、脫氨基、或受損 DNA；（

2）在超保真擴(kuò)增中搭配dUTP和熱敏UDG，用于防止 PCR 體系中攜帶污染。此外，也多用于USER 克隆。

G5U Plus DNA聚合酶是具有熱啟動(dòng)功能的版本，由適配體封閉酶活性中心，在反應(yīng)結(jié)束恢復(fù)室溫后，

適配體可逆的重新封閉聚合酶。其熱啟動(dòng)功能確保在25℃以下無活性，高于50℃后迅速恢復(fù)100%活性。

熱啟動(dòng)功能便于室溫建立反應(yīng)體系、有效的降低低溫下的非特異擴(kuò)增、提高多重超保真擴(kuò)增效果，使超保真擴(kuò)增達(dá)到最佳。

主要特征

超保真擴(kuò)增：與Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能，是載體構(gòu)建、點(diǎn)突變、NGS模板擴(kuò)增、基因合成的最佳用酶。

識別dUTP底物：能夠讀取和擴(kuò)增含有尿嘧的模板，具有“U" 特征。

防污染擴(kuò)增：在PCR擴(kuò)增中可以使用dUTP替代dTTP，建立防污染高保真擴(kuò)增。

快速擴(kuò)增：具有4kb/min的擴(kuò)增能力。

長片段擴(kuò)增：質(zhì)粒、λDNA 等簡單模板>20 kb，復(fù)雜基因組模板>8 kb。

單位定義

一個(gè)活力單位即在72°C條件下，30分鐘內(nèi)催化10 nmol dNTP的摻入反應(yīng)成為酸不溶性物質(zhì)所需的酶量。

儲(chǔ)存

（1）酶儲(chǔ)存液：10mM Tris-HCl，pH7.6，100mM NaCl，0.05% Tween20, 1mM DTT，0.5mM EDTA，50%甘油。

（2）置于-20°C以下，可保存3年。

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