熱穩定無機焦磷酸酶試劑

熱穩定無機焦磷酸酶試劑純化自重組 E. coli 菌株，攜帶從極度耐熱的 Thermococus litoralis 中克隆的無機焦磷酸酶基因。

該焦磷酸酶催化無機焦磷酸鹽水解生成正磷酸鹽。 P207–4 + H20 →2HP04–2。該酶在100℃加熱4h仍然具有100%活性，

因此可用于PCR反應，解除生成的無機焦磷酸鹽對PCR的抑制，增強DNA的復制。

組分

組分名稱數量

Thermostable Inorganic Pyrophosphatase (2 U/μl)100 μl/1 ml

活性定義

1單位指標準反應條件下：0.5ml反應體系，50mM Tricine pH8.5，1mM MgCl2和0.32mM PPi，75℃反應10 鐘，每分鐘催化

無機焦磷酸鹽生成1μmol 磷酸鹽的酶量。

儲存

-20℃可保存3年。

使用注意事項

（1） 該酶在多種反應Buffer中均具有活性，通常該酶在tHDA擴增、PCR、測序反應等實驗中，可直接接入即可。

（2） 該酶的用量在不同的實驗中需要優化，通常在5~50U/ml濃度調整。

（3） 該酶不可以熱失活。

熱穩定無機焦磷酸酶試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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