CCK-8細胞增殖和凋亡檢測試劑

CCK-8細胞增殖和凋亡檢測試劑增殖與毒性檢測試劑是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑，因其操作簡單快速、高靈敏度且細胞毒性低等成為替代MTT法檢測細胞生長密度的最好方法。該試劑盒利用水溶性四唑鹽-WST?-8在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量與活細胞數量成正比。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。

優勢

靈敏度高，數據重復性好

操作簡單，安全性高

細胞毒性低，無需放射性同位素

單一組分，無需配制

應用

細胞增殖測定、細胞毒性測定、藥物篩選、腫瘤藥敏試驗

儲存

-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反復凍融會增加背景值。

注意事項

1. 接種時注意細胞懸液一定要混勻，以避免細胞沉淀下來，導致每孔中的細胞數量不等，可以每接種幾個孔就混勻一下。培養板周圍一圈孔培養基容易揮發，為了減少誤差，建議培養板的四邊每孔只加培養基或PBS，而不作為指標檢測孔。

2. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設法去除。

3. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。

4. 培養時間根據細胞種類的不同和每孔內細胞數量的多少而異。一般情況下，白細胞較難染色，因此需要較長的培養時間或增加細胞數量 (～105個細胞/孔)。懸浮細胞與貼壁細胞相比較難染色。對于懸浮細胞，在培養1- 4小時后，可先從培養箱中取出，目察染色程度或用酶標儀測定決定。若染色困難，可將培養板放回培養箱，繼續培養數小時后再確定。 染色的最佳時間可定為懸浮細胞的最佳培養時間。對于貼壁細胞，培養時間一般為1-4小時，但在培養30分鐘左右即可取出肉眼觀察染色程度 (根據細胞種類而定，需要摸索一下條件)。

5. 若細胞培養時間較長，培養基顏色發生變化或 pH發生變化，建議更換新鮮的培養基后再加CCK-8試劑。

CCK-8細胞增殖和凋亡檢測試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應25min的檢測結果，可以看到檢測反應<20min(達平臺期)。

應用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應結束后，倒置反應管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現出醒目的綠色，陰性表現出橙色，區分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質耐受性很好。以體外轉錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應20min后檢測結果。

應用實例3：A3825-01 紅黃變色反應（肉眼觀察）

以 體外轉錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結束反應起

始前，下圖為 65 度反應 30min 后。

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